سنجش هاي ايمني راديواکتيو(2)

با توجه به اينکه اساس اين روش رقابت است و رقابت در محدوديت معنا مي يابد لذا به اين روش، معرف محدود (Restricted Reagent) نيز مي گويند. در اين روش ابتدا رقابت ميان مقادير متفاوت و معيني (استاندارد) از آنتي ژن سرد با مقدار معين و ثابتي از آنتي ژن گرم بر سر اتصال مقدار معين و محدودي از آنتي بادي ايجاد مي شود که ماحصل آن بدست آمدن منحني استاندارد است. با توجه به رابطه معکوس ميان کمپلکس راديواکتيو و ميزان آنتي ژن سرد، همواره منحني هاي استاندارد شکلي نزولي دارند. در منحني استاندارد هميشه محور x ها نشاندهنده غلظت آنتي ژن سرد و محور y ها نشاندهند? ميزان کمپلکس راديواکتيو بر حسب CPM (Count per Minute) است. همانطور که مي دانيد راديواکتيويته و ناپايداري هسته برخي از ايزوتوپ هاي اتمي يک پارامتر ثابت فيزيکي است و همانگونه که در اساس روش RIA ذکر شد ميزان آنتي ژن گرم، همواره ثابت و معين است. بنابراين ميزان راديواکتيويته تمام غلظتهاي استاندارد با يکديگر برابر بوده، همواره منحني استاندارد بصورت خطي موازي محور x ها خواهد بود. يعني علي رغم اينکه ميزان کمپلکس راديواکتيو در هر غلظت استاندارد متفاوت است اما ميزان راديواکتيويته کل هر نقطه استاندارد با ساير نقاط برابر است لذا در اين مرحله نياز به جداسازي آنتي ژن گرم از کمپلکس راديواکتيو وجود دارد. مرحله جداسازي با روش هاي متفاوتي امکان پذير است که از ذکر جزئيات آن پرهيز نموده، به اختصار از آن مي گذريم. استفاده از آنتي بادي دوم- بکارگيري محلول هاي پليمري مانند PEG، استفاده از تثبيت آنتي بادي ها، بکارگيري ذرات مغناطيسي و ... پس از مرحله جداسازي رابطه معکوس ميان غلظت آنتي ژن سرد و کمپلکس راديواکتيو مي تواند مبناي سنجش آنتي ژن موجود در نمونه مورد بررسي باشد. يعني مي توان از ميزان کمپلکس راديواکتيوي که در مجاورت آنتي ژن سرد مجهول تشکيل مي گردد با استفاده از منحني استاندارد به ميزان آنتي ژن سرد پي برد. هشت سال پس از ابداع روش RIA، Hales و Miels با نشاندار سازي آنتي بادي بجاي آنتي ژن، روش IRMA را معرفي کردند. اساس اين روش باز هم واکنش آنتي ژن- آنتي بادي است. علي رغم اينکه اغلب اين روش بر خلاف RIA بصورت غير رقابتي است اما مي تواند بصورت رقابتي هم باشد. در روش IRMA نشاندار بودن آنتي بادي الزامي است نه رقابتي بودن واکنش. در هر حال، امروزه اغلب روش هاي IRMA بصورت غير رقابتي و ساندويچي اجرا مي گردند. يعني آناليت توسط دو آنتي بادي ساندويچ مي گردد که يکي از اين آنتي بادي ها توسط ماده راديواکتيو نشاندار شده است. در اين روش به ازاي هر آناليت يک ساندويچ نشاندار تشکيل مي گردد، لذا رابطه مستقيم ميان آناليت و کمپلکس راديواکتيو برقرار است. در عمل، ابتدا به ازاي مقادير معين آناليت (استانداردها) کمپلکس هاي راديواکتيو تشکيل مي گردد. غلظت آناليت روي محور x ها و ميزان کمپلکس راديواکتيو (CPM) روي محور y ها قرار گرفته، بدين ترتيب، منحني صعودي که نشانه رابطه مستقيم غلظت آناليت با کمپلکس راديواکتيو است، تشکيل مي گردد. بر اساس ميزان کمپلکس راديواکتيو در نمونه هاي مجهول و استفاده از منحني فوق، غلظت آناليت مجهول محاسبه مي گردد. قبلاً اشاره کرديم که با يک جابجايي ساده در محل نشاندار سازي، روش RIA به IRMA تبديل مي شود. اما بايد يادآور شويم که اين عمل مزاياي متدولوژيک زيادي را به ارمغان مي آورد؛ در اينجا به برخي از اين موارد اشاره مي کنيم: